Pathologiai Intézet

Tumor citogenetikai laboratórium

Laboratóriumunk rosszindulatú daganatokban megjelenő kromoszómális eltéréseket azonosít konvencionális és molekuláris citogenetikai módszerekkel. A beérkező csontvelő, perifériás vér, nyirokcsomó, liquor, ascites és egyéb szövetminták döntő többségét onkohematológiai betegségek kapcsán vizsgáljuk. G-sávozást követő kariotipizálással jellemezni tudjuk az osztódó sejtek teljes kromoszóma készletét számbeli-, illetve a legalább 5-10 Mb hosszúságú genomikus tartományt érintő, szerkezeti aberrációk felderítésével. A hagyományos citogenetikai analízissel nem detektálható, kriptikus eltéréseket célzott fluoreszcens in situ hibridizációs (FISH) technikával szűrjük, mely nem igényel sejttenyésztést, így gyakorlatilag bármely citológiai-, illetve hisztológiai minta vizsgálatára alkalmas. Ezt a módszert jelenleg a klinikai szempontból egyértelműen indokolt esetekben, terápia releváns aberrációk azonosítására használjuk. Nehezen értékelhető, többszörös átrendeződéseket mutató kariotípus feltérképezéséhez metafázis preparátumokon is végzünk FISH analízist. Klinikai diagnosztikai tevékenységet a Pécsi Tudományegyetemen kívül dél-dunántúli túlsúllyal, több régióra kiterjedően végzünk.

Az elérhető FISH szondák listája megtekinthető itt.

Kutatás

Az interfázis-FISH az onkopatológiai diagnosztika hatékony eszköze. A preparátumok értékelését manapság a legtöbb laboratórium manuálisan végzi, ennek kapcsán azonban felmerül néhány nem elhanyagolható probléma: (i) alacsony pozitivitás esetén a statisztikai megbízhatóság érdekében nagyszámú sejtmag vizsgálatára van szükség, mely azonban időigényes folyamat; (ii) az értékelő elfogultsága a pozitivitás alul- vagy felülbecsléséhez vezethet, különösen akkor, ha a pozitív sejtek aránya nagyon alacsony, vagy kiemelkedően magas; (iii) az értékelő koncentráltsági szintje befolyásolhatja a vizsgálat eredményét; (iv) az értékelők és a laboratóriumok közötti variabilitás kérdésessé teszi az eredmények összehasonlíthatóságát; (v) a transzlokációk vizsgálatakor döntő jelentőséggel bíró fúziós (kolokalizált) szignálnak nincsen egyértelmű, objektív definíciója. E nehézségek áthidalhatók motorizált mikroszkópia és digitális képanalízis alkalmazásával.

Az elmúlt években a következő 3D automatizált jelmintázat értékelő eljárásokat dolgoztuk ki: (i) genotípus vizsgálat citológiai preparátumon (BCR/ABL juxtapozíció kimutatása krónikus mieloid leukémiában); (ii) kombinált fluoreszcens feno- és genotipizálás citológiai preparátumon minimális reziduális betegség kimutatásához (CD10 immunjelölést követően ETV6/RUNX1 fúzió kimutatása gyermekkori akut limfoblasztos leukémiában); (iii) kombinált fénymikroszkópos immunfenotipizálás és négymarkeres molekuláris citogenetikai analízis lenyomati készítményen (CK-7 kromogén immunfestést követő UroVysion vizsgálat hólyagtumorokban); (iv) genotípusos jellemzés hisztológiai környezetben (IGH/CCND1 és IGH/BCL-2 transzlokációk felderítése köpenysejtes -, illetve follikuláris limfómában). Úgy gondoljuk, hogy az általunk beállított módszerek hozzájárulnak a patológiai diagnosztika modernizálásához, ezért a jövőben bővíteni szeretnénk automatizált interfázis citogenetikai potenciálunkat és kapacitásunkat.

Publikációk

Kajtár B, Méhes G, Lörch T, Deák L, Kneifné M, Alpár D, and Pajor L: Automated Fluorescent In Situ Hybridization (FISH) Analysis of t(9;22)(q34;q11) in Interphase Nuclei. Cytometry Part A, 2006 Jun;69(6):506-14.

Alpár D, Kajtár B, Kneif M, Jáksó P, László R, Kereskai L, Pajor L: Automated detection of residual leukemic cells by consecutive immunolabeling for CD10 and FISH for ETV6/RUNX1 rearrangement in childhood acute lymphoblastic leukemia. Cancer Genetics and Cytogenetics, 2007 Feb;173(1):23-30.

Pajor G, Süle N, Alpár D, Kajtár B, Kneif M, Bollmann D, Somogyi L, Pajor L: Increased efficiency of detecting genetically aberrant cells by UroVysion test on voided urine specimens using automated immunophenotypical pre-selection of uroepithelial cells. Cytometry Part A, 2008 Mar;73A(3):259-65.

Alpár D, Hermesz J, László R, Kereskai L, Jáksó P, Pajor G, Pajor L, Kajtár B: Automated FISH analysis using dual-fusion and break-apart probes on paraffin-embedded tissue sections. Cytometry Part A, 2008 Jul;73(A):651-57.

László R, Alpár D, Kajtár B, Lacza Á, Ottóffy G, Kiss Cs, Bartyik K, Nagy K, Pajor L. Detection of early precursors of t(12;21) positive pediatric acute lymphoblastic leukemia during follow-up. Pediatric Blood and Cancer, 2010 Jan;54(1):158-60.

Alpár D, Nagy G, Hohoff C, Kajtár B, Bartyik K, Hermesz J, Jáksó P, Andrikovics H, Kereskai L, Pajor L. Sex chromosome changes after sex-mismatched allogeneic bone marrow transplantation can mislead the chimerism analysis. Pediatric Blood and Cancer, 2010 Dec;55:1239-42.

 

 

 

Alpár D, Kereskai L. Three-step cytogenetic evolution in paediatric acute lymphoblastic leukaemia with t(12;21). BloodMed, 2010 Dec; 251.

Alpár D. Recurrent disease or donor cell leukemia? Brain teaser after allogeneic bone marrow transplantation. Chimerism, 2011 Jan;2(1):19-20.

Nagy Z, Kajtár B, Jáksó P, Dávid M, Kosztolányi S, Hermesz J, Kereskai L, Pajor L, Alpár D. Evolutionary sequence of cytogenetic aberrations during the oncogenesis of plasma cell disorders. Direct evidence at single cell level. Leukemia Research, 2011 Aug;35(8):1114-6.

Pajor G, Somogyi L, Melegh B, Alpár D, Kajtár B, Farkas L, Kneif M, Bollmann D, Pajor L, Süle N. Urovysion: considerations on modifying current evaluation scheme, including immunophenotypic targeting and locally set statistically derived diagnostic criteria. Cytometry Part A, 2011 May;79(5):375-82.

Pajor G, Alpár D, Kajtár B, Melegh B, Somogyi L, Kneif M, Bollmann D, Süle N, Pajor L. Automated signal pattern evaluation of a bladder cancer specific multiprobe-FISH assay applying a user-trainable workstation. Microscopy Research and Technique, 2012 Jun;75(6):814-20.

Haltrich I, Csóka M, Kovács G, Török D, Alpár D, Ottoffy G, Fekete G. Six cases of rare gene amplifications and multiple copy of fusion gene in childhood acute lymphoblastic leukemia. Pathology & Oncology Research (accepted)

Alpár D, de Jong D, Savola S, Yigittop H, Kajtár B, Kereskai L, Pajor L, Szuhai K. MLPA is a powerful tool for detecting lymphoblastic transformation in chronic myeloid leukemia and revealing the clonal origin of relapse in pediatric acute lymphoblastic leukemia. Cancer Genetics (accepted)

Pajor G, Kajtár B, Pajor L, Alpár D. State-of-the-art FISHing: automated analysis of cytogenetic aberrations in interphase nuclei. Review. Cytometry Part A (accepted)

 

 

 

Oktatás

A laboratórium részt vesz az "In situ hibridizáció–interfázis citogenetika és alkalmazásának lehetőségei a patológiai gyakorlatban.", illetve a "Citogenetikai elváltozások hemopoetikus tumorokban" című PhD kurzusok oktatásában.

Munkatársak

Alpár Donát, PhD, ISAC Scholar
tudományos munkatárs
+36-72-536-000/31243, 31505
e-mail: donat.alpar@kk.pte.hu

Hermesz Judit, BSc
orvosdiagnosztikai laboratóriumi analitikus
+36-72-536-000/31505

Pajor Gábor, PhD
tudományos munkatárs
+36-72-536-000/35301

Sepsei Ivett, BSc
orvosdiagnosztikai laboratóriumi analitikus
+36-72-536-000/31505

Horváth Bálint
biológus
+36/72-536-001/31505

Hasznos linkek

http://atlasgeneticsoncology.org/
http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman
http://www.metasystems-international.com/

http://www.cytometrycertification.org/

http://isac-net.org